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非洲豬瘟實驗室將會越來越重要。

檢疫實驗室也被稱為動物疫病實驗室，目前國家最重視的檢疫類實驗室就是非洲豬瘟實驗室。2019年7月份，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部下達通知，要嚴(yán)格開展非洲豬瘟實驗室檢測，減少動物疫病的風(fēng)險。

非洲豬瘟實驗室主要針對跨省調(diào)運種豬在產(chǎn)地檢疫實驗室進行檢測，對生豬進行對口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病、豬圓環(huán)病毒病、布魯氏菌病等5種動物疫病的檢驗檢測及風(fēng)險評估。

豬瘟有多可怕？

科普時間

眾所周知，非洲豬瘟是一種非?？膳碌募膊?，會導(dǎo)致豬大批量的死亡。其特征是發(fā)病過程短，最急性和急性感染死亡率高達100%，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱，心跳加快，呼吸困難，部分咳嗽，眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物，皮膚發(fā)紺，淋巴結(jié)、腎、胃腸粘膜明顯出血，非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似，只能依靠實驗室監(jiān)測確診。

不過不用擔(dān)心的是非洲豬瘟，只傳染豬不傳染人。非洲豬瘟不是“人畜共患病”，不傳染人，但對豬來說是非常致命的。非洲豬瘟疫情需要農(nóng)業(yè)部門和養(yǎng)殖者的重視。

2007年以來，非洲豬瘟在全球多個國家發(fā)生、擴散、流行，特別是俄羅斯及其周邊地區(qū)。2017年3月，俄羅斯遠東地區(qū)伊爾庫茨克州發(fā)生非洲豬瘟疫情，疫情發(fā)生地距離我國較近，僅為1000km左右；

我國是養(yǎng)豬及豬肉消費大國，生豬出欄量、存欄量以及豬肉消費量均位于全球首位，每年種豬及豬肉制品進口總量巨大，與多個國家貿(mào)易頻繁；而且，我國與其它國家的旅客往來頻繁，旅客攜帶的商品數(shù)量多、種類雜。因此，非洲豬瘟傳入我國的風(fēng)險日益加大，一旦傳入，其帶來的直接以及間接損失將不可估量。

對此，2017 年 4 月 12 日，我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布了關(guān)于進一步加強非洲豬瘟風(fēng)險防范工作的緊急通知。2019年7月份，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部下達通知要嚴(yán)格開展非洲豬瘟實驗室檢測，減少動物疫病的風(fēng)險。

農(nóng)村農(nóng)業(yè)部最新通知

農(nóng)業(yè)農(nóng)村部表示，為貫徹落實《國務(wù)院辦公廳關(guān)于加強非洲豬瘟防控工作的意見》(國辦發(fā)〔2019〕31號)要求，建立產(chǎn)地檢疫風(fēng)險評估機制，促進種豬規(guī)范有序調(diào)運，穩(wěn)定生豬生產(chǎn)發(fā)展，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部就非洲豬瘟疫情應(yīng)急響應(yīng)期間，調(diào)整和加強跨省調(diào)運種豬產(chǎn)地檢疫有關(guān)事項發(fā)布通知，要求調(diào)整跨省調(diào)運種豬產(chǎn)地檢疫實驗室檢測項目，嚴(yán)格開展動物疫病風(fēng)險評估。

通知要求，根據(jù)當(dāng)前生豬生產(chǎn)形勢需要和動物防疫管理工作實際，對跨省調(diào)運種豬產(chǎn)地檢疫實驗室檢測項目進行調(diào)整，繼續(xù)嚴(yán)格開展非洲豬瘟實驗室檢測，檢測數(shù)量(比例)100%；對口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病、豬圓環(huán)病毒病、布魯氏菌病等5種動物疫病，在種豬場日常監(jiān)測的基礎(chǔ)上開展風(fēng)險評估，不再進行實驗室檢測。在非洲豬瘟實驗室檢測方面，采集的血液樣品可按照一定的生豬數(shù)量進行混樣，具體混樣數(shù)量可根據(jù)有關(guān)技術(shù)指標(biāo)科學(xué)確定；樣品送檢前至種豬調(diào)出前對擬調(diào)運種豬采取隔離觀察措施的，檢測時限可以延長至調(diào)運前7天。

在嚴(yán)格開展動物疫病風(fēng)險評估方面，通知提出，在暫?？谔阋叩?種動物疫病實驗室檢測期間，各地要加強對種豬場的動物疫病風(fēng)險評估，風(fēng)險評估達到要求的，方可對其跨省調(diào)運種豬出具動物檢疫證明。請各省級畜牧獸醫(yī)主管部門制定本省份的種豬場動物疫病風(fēng)險評估方案，評估病種應(yīng)當(dāng)包括口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病、豬圓環(huán)病毒病、布魯氏菌病等動物疫病，評估內(nèi)容應(yīng)當(dāng)包括區(qū)域動物疫病流行病學(xué)調(diào)查情況、種豬場防疫條件、養(yǎng)殖檔案記錄、有關(guān)疫病日常檢測情況等。由輸出地縣級動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)按照種豬場動物疫病風(fēng)險評估方案，對種豬場開展風(fēng)險評估。評估結(jié)果有效期不超過3個月。

農(nóng)業(yè)農(nóng)村部指出，跨省調(diào)運種豬到達輸入地后，當(dāng)?shù)貏游镄l(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)要監(jiān)督種豬貨主落實動物防疫主體責(zé)任，嚴(yán)格執(zhí)行隔離觀察有關(guān)措施，指導(dǎo)種豬貨主簽訂承諾書、建立隔離觀察臺賬記錄，確保種豬安全和可追溯。

非洲豬瘟實驗室如何建設(shè)？

設(shè)計方案

國家越來越重視非洲豬瘟對農(nóng)業(yè)與養(yǎng)殖業(yè)的影響，所以越來越多人開始建設(shè)檢疫實驗室，進行動物疫病的檢測項目。那么，非洲豬瘟實驗室應(yīng)該如何建設(shè)呢？

非洲豬瘟實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進行，從試劑準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)單向流動。

實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制是非洲豬瘟實驗室的重中之重，雖然非洲豬瘟實驗室沒有嚴(yán)格的空氣潔凈度要求，但是為避免各個功能區(qū)之間交叉污染的可能性，應(yīng)采用獨立送風(fēng)、全送全排的氣流組織形式，并保證各功能區(qū)的壓力梯度要求。

試劑準(zhǔn)備區(qū)

主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。

標(biāo)本制備區(qū)

主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。

擴增區(qū)

已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。

產(chǎn)物分析區(qū)

主要進行的操作為擴增片段的測定。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。

非洲豬瘟實驗室的核心問題是如何避免污染，由于一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實驗結(jié)果必須作廢，需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費人力物力。非洲豬瘟實驗室常見有擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染等。因此要避免污染，事前預(yù)防是關(guān)鍵。

專業(yè)的設(shè)計是避免污染的源頭，首先應(yīng)做到各個功能區(qū)域科學(xué)合理布置；各個功能區(qū)域要有明顯的標(biāo)記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等)，以避免各個不同實驗區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。

其次應(yīng)具備合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用獨立送風(fēng)、全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；嚴(yán)格的壓力梯度控制、緩沖、門開啟關(guān)閉互鎖，以確?！安淮L(fēng)”。

用于非洲豬瘟病毒檢測的實驗室，推薦配置以下設(shè)備：II級生物安全柜、混勻儀（渦旋振蕩器）、高速離心機、金屬浴或恒溫水浴鍋、組織破碎儀（均質(zhì)器/勻漿儀）、移液器、冷藏冷凍冰箱、高壓滅菌鍋。同時，建議實驗室配備合適的個人防護用品，如防護服、手套、口罩等。

系統(tǒng)的培訓(xùn)、規(guī)范的管理是非洲豬瘟成功運行的重點，可圍繞以下內(nèi)容建立健全培訓(xùn)與管理制度：

1、擴增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須進行上崗培訓(xùn)，經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作；

2、操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施；

3、在實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換；

4、清潔工作及時、正確；除常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外，對一些實驗設(shè)備還應(yīng)進行高壓消毒處理；

5、嚴(yán)格控制進出實驗室的人員；實驗工作結(jié)束后，必須立即對本區(qū)進行清潔；與實驗無關(guān)的人員不得隨意進出實驗室，有條件的情況下要設(shè)置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門；盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。

6、擴增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，廢液不能在實驗室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如焚燒等；

7、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實驗人員的安全防護；

8、完備的實驗室配套設(shè)施是保證實驗工作的必要條件，應(yīng)根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器，如生物安全柜、離心機、紫外滅菌燈、超凈工作臺、加樣器等；

AT THE END

結(jié)尾總結(jié)

非洲豬瘟實驗室會越來越重要

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒（ASFV）引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性動物傳染病，臨床上以高熱、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)出血和高死亡率為特征，易感豬群的病死率高達100%。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。目前，針對非洲豬瘟防控，尚無有效的商品化疫苗，防控重點是做好生物安全管理和早期診斷撲殺凈化。所以非洲豬瘟實驗室的建設(shè)會越來越重要。

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